Выведение культуры микроорганизмов с высоким кератинолитическим индексом
Цель проекта
Получение высокоактивных рекомбинантных штаммов с применением методов генной инженерии является одним из основных направлений современной биотехнологии. Данная работа будет организована и проведена в рамках программы развития научнообразовательной школы МГУ «Молекулярные технологии живых систем и синтетическая биология».
Задачи проекта
1
Поиск и анализ статей – исследований грибов кератиноцитов с помощью базы данных PubMed.
2
Выбор объекта для работы (грибкератиноцитов). Поиск последовательности целевого гена в базе данных NCBI
3
Выделение ДНК из клеток грибакератиноцита
4
Выделение гена сериновой / аспарагиновой экзопротеазы
5
Амплификация и клонирование целевого гена (в компании Евроген)
6
Трансформация в плазмиду/ в геном вируса
7
Выделение ДНК
8
Котрансформация в штамм-реципиент ( дрожжи).
9
Скрининг трансформантов с помощью ПЦР
10
Скрининг целевых и базовых активностей
Этап 1. Работа с литературой
1.Обучение методики выделения и ведения культур мицелиальных грибов (поиске организма целевого гена);
2. Освоение баз данных NCBI ,Genbank, Uniprot и программ по биоинформатике;
3. Поиск генов сериновых и аспарагиновых экзопротеазы типа SUB и SUB-1.
Этап 2. Амплификация и клонирование целевого гена соответствующие экспрессионные векторы
Полученную экспрессионную плазмиду трансформируют в клетки E. coli для определения последовательности клонированного гена (чтобы исключить делеции, мутации и инсерции)
Полученную экспрессионную плазмиду трансформируют в клетки E. coli для определения последовательности клонированного гена (чтобы исключить делеции, мутации и инсерции)
Этап 3. Получение ГМО грибов и скрининг результатов трансформации
• Накопление и выделение достаточного для трансформации количества ДНК (около 10 мкг).
• Экспрессионную плазмиду, вместе с плазмидой, содержащей селективный маркер, трансформируем в клетки дрожжей (Saccharomyces cerevisiae).
• Первичный скрининг грибных рекомбинантных клонов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), а также секвенирование гена при наличие возможсноти.
• Накопление и выделение достаточного для трансформации количества ДНК (около 10 мкг).
• Экспрессионную плазмиду, вместе с плазмидой, содержащей селективный маркер, трансформируем в клетки дрожжей (Saccharomyces cerevisiae).
• Первичный скрининг грибных рекомбинантных клонов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), а также секвенирование гена при наличие возможсноти.
Этап 4. Накопление, выделение и анализ эффективности работы фермента.
Лабораторная ферментация в колбах Скрининг целевых и базовых активностей Масштабирование и получение ФП Биохимический анализ и прикладные испытания ФП 42 определения хромосомной интеграции целевых генов. Далее проводят ферментацию полученных трансформантов в качалочных колбах с целью определения уровня биосинтеза базовых и целевых активностей.
Лабораторная ферментация в колбах Скрининг целевых и базовых активностей Масштабирование и получение ФП Биохимический анализ и прикладные испытания ФП 42 определения хромосомной интеграции целевых генов. Далее проводят ферментацию полученных трансформантов в качалочных колбах с целью определения уровня биосинтеза базовых и целевых активностей.
Преподаватели проекта
Молчанов Александр Юрьевич
н.с. Биологического факультета МГУ и учитель гимназии УГ
Кейси Алекс Эверет
асп. второго года, кафедры Микология МГУ
© 2023 https://school.msu.ru/